pNPP پارا نیترو فنیل فسفات para nitrophenyl phosphate برند مرک با شماره کاتالوگ 487663 یک بستر عالی برای سنجش الایزا مبتنی بر آلکالین فسفاتاز به شمار میرود. محصول نهایی محلول زرد را تولید میکند که می تواند در nm 405 تا 410 نانومتر خوانده شود و هر دو تعیین جنبشی و نقطه پایانی را میتوان انجام داد. این ماده شیمیایی به صورت آماده برای استفاده عرضه میشود و همچنین یک رقیق کننده آماده برای استفاده به طور جداگانه نیز موجود است.
از جمله مشخصات این مواد شیمیایی (پارا نیترو فنیل فسفات para nitrophenyl phosphate) میتوان به موارد زیر اشاره کرد:
• ATP Competitive N
• مایع شفاف تا کمی زرد رنگ
• فرمولاسیون به صورت کنسانتره 50X عرضه میشود.
• برگشت پذیر N
• سطح کیفیت MQ100
در این بخش به بررسی روش استفاده از پارا نیترو فنیل فسفات para nitrophenyl phosphate خواهیم پرداخت:
1. محلول بستر 1X p-NPP را آماده کنید: به 39 قسمت dH2O 1 قسمت کنسانتره p-NPP 50X و 10 قسمت بافر بستر p-NPP اضافه کنید. خوب مخلوط کنید و دور از نور نگهداری کنید. این معرف رقیق شده تا 10 ساعت پس از آماده سازی مناسب است.
2. تمام انکوباسیونهای مورد نیاز را با آنتی بادیها و پروبهای نشاندار شده با آلکالین فسفاتاز تکمیل کنید.
3. پلیت را حداقل 4 بار با نمک تریس بافر (TBS) حاوی 0.1 درصد مواد شوینده Tween®-20 بشویید. از بافرهای فسفات استفاده نکنید، زیرا فسفات معدنی یک مهار کننده قوی آلکالین فسفاتاز است.
4. پس از شستشوی نهایی، تمام بافر باقیمانده را تکان داده و از پلیتها پاک کنید.
5. 100 میکرولیتر از محلول بستر 1X p-NPP (تهیه شده در مرحله 2) را به هر پلیت اضافه کنید و به مدت 15-60 دقیقه انکوبه کنید. [توجه: زمان انکوباسیون بهینه ممکن است بسته به مقدار آنزیم موجود متفاوت باشد. اگر رنگ خیلی سریع ایجاد شود، رقیق کردن پروب، آنتی بادی یا معرف نشاندار شده با آلکالین فسفاتاز ممکن است مورد نیاز باشد.]
6. واکنش را با افزودن 100 میکرولیتر NaOH 1N متوقف کنید.
7. جذب را در 405 نانومتر بخوانید.
توجه: تغییرات در زمان، حجم معرف و دما ممکن است نیاز به استانداردسازی بیشتر توسط کاربر داشته باشد.
از جمله مشخصات فیزیکوشیمیایی ماده شیمیایی (پارا نیترو فنیل فسفات para nitrophenyl phosphate) به شرح زیر است:
• N نفوذپذیر سلولی
• بستر هدف اولیه برای سنجش الایزا مبتنی بر آلکالین فسفاتاز
• دستورالعمل های ویژه اگر محلول به رنگ زرد روشن یا کدر شد، دور بیندازید
• حمل و نقل استاندارد سموم
• ذخیره سازی +2 درجه سانتیگراد تا +8 درجه سانتیگراد
• محافظت از نور
• منجمد نکنید
• دستورالعمل های ویژه اگر محلول به رنگ زرد روشن یا کدر شد، دور بیندازید.
یکی از مواد شیمیایی تولید شده توسط شرکت مرک پارا نیترو فنیل فسفات para nitrophenyl phosphate با کد 487663 است. از این ماده شیمیایی عموما سنجش الایزا مبتنی بر آلکالین فسفاتاز استفاده میشود. برای خرید انواع محصولات آزمایشگاهی به ویژه ماده شیمیایی پارا نیترو فنیل فسفات para nitrophenyl phosphate میتوانید به فروشگاه اینترنتی رازی طب آریا کوشا مراجعه کنید.
کاربرد: سنجش الایزا مبتنی بر آلکالین فسفاتاز